Análisis de célula única: citometría espectral

Responsable

Dra. Eulalia Rodríguez Martín

Personal

Paula Batres Faba (TGS Lab)

Contacto

Hospital Universitario Ramón y Cajal

Servicio de Inmunología

Planta -1 izquierda

paulabatres03(ELIMINAR)@gmail.com

eulalia.rodriguez@salud.madrid.org

  • Citometría espectral: descripción y destacables

    El servicio

    En el servicio de Análisis de Célula Única, utilizamos técnicas avanzadas de citometría, combinando citómetros convencionales y un citómetro espectral con módulo de sorting. La citometría de flujo es una técnica que permite medir simultáneamente múltiples características ópticas (dispersión de luz y fluorescencia) de cada una de las células o partículas presentes en una suspensión. Ello nos va a permitir definir las propiedades de una población celular o de las subpoblaciones que la componen. Los citómetros poseen un sistema combinado de flujo, óptica y electrónica para llevar a cabo este proceso. El sistema de fluido introduce y restringe a las células para su análisis individual, el sistema óptico excita la muestra y colecta las señales de luz provenientes de la misma y el sistema electrónico convierte la señal óptica en una señal electrónica y la digitaliza para el análisis en el ordenador.

    Los estudios de investigación actuales en el campo de la biología celular indagan en las propiedades individuales de las células que componen un sistema. Para ello, es necesario poder purificar poblaciones celulares, con el fin de eliminarlas de una muestra o enriquecerla. La separación celular por citometría de flujo o "cell sorting", llevada a cabo mediante separación de gotas cargadas eléctricamente, es el proceso de separación física de poblaciones celulares que se diferencian en uno o varios parámetros que son analizables por citometría de flujo. Este proceso es esencial en investigaciones de procesos biológicos complejos, como la respuesta inmunitaria y la progresión de enfermedades. Nuestra unidad está diseñada para facilitar descubrimientos innovadores a través de estas tecnologías de vanguardia.

    Los citómetros convencionales ofrecen análisis altamente resolutivos, pero están limitados en la cantidad de fluorocromos que pueden detectar simultáneamente y requiere compensaciones, uno de los elementos más complejos en el uso de la citometría. En cambio, la citometría espectral permite discriminar potencialmente más de 25 fluorocromos en un solo tubo de marcaje, sin requerir la compensación entre los diferentes fluorocromos. Asimismo, permite utilizar moléculas fluorescentes muy similares dado que pueden distinguirse unos de otros debido a la huella espectral única que permite diferenciarlos.

    Destacables

    • Asesoramiento sobre los paneles y anticuerpos monoclonales adecuados de manera personalizada para cada investigación
    • Cartera de servicios de citometría de flujo convencional y espectral
    • Posibilidad de aislar y recolectar células específicas basadas en sus características únicas, facilitando estudios posteriores más precisos y personalizados en colaboración con las Unidades Centrales de Apoyo del IRYCIS.
  • Solicitud y disponibilidad

  • Equipamiento
    • 1 Citómetro espectral CS Aurora de Cytek de 3 láseres (36 colores) con módulo de sorting – Infraestructura financiada por el Instituto de Salud Carlos III (ISCIII) y los fondos Next Generation EU (IFEQ21/00175).

    Este equipo cuenta con 41 detectores (38 de fluorescencia, 2 de SSC y uno de FSC). Además, el equipo está instalado con una campana de flujo laminar y cuenta con nozzles de 70, 85, 100 y 130 micras. Es capaz de separar 4 vías en tubos de 5 mililitros, 6 vías en tubos de eppendorf y en placas de 96 pocillos. Además, puede mantener tanto la muestra como los tubos de recogida a la temperatura elegida. Software de análisis: SpectroFlo.

    • 2 FACSLyric de 3 láseres (azul, rojo y violeta) con 12 colores. Alta sensibilidad

    • 1 FACSCANTO II de 3 láseres (azul, rojo y violeta) con 8 colores

  • Cartera de servicios
    • Sorting Aurora CS 1 muestra
    • Adquisición Aurora CS 1 muestra
    • FACSLyric de 3 láseres (12 colores)
    • FACsCANTO II de 3 laseres (8 colores)
    • Diseño de estudio  (Incluye: selección de poblaciones, elección de marcadores y fluorocromos, matriz de compensación) Imprescindible antes de la adquisición y/o sorting
    • Puesta a punto de experimentos nuevos (incluye: controles negativos, perfil espectral, QC control) Imprescindible antes de la adquisición y/o sorting
    • Puesta a punto de fluorocromos nuevos
    • Análisis de datos de citometría convencional y espectral
    • Uso de estación de trabajo con el programa FlowJo (Aurora) (por hora)
    • Uso de estación de trabajo con el programa Infinicyt  (por hora)
    • Estudio y screening inmunofenotípico de mastocitosis en Citómetro Espectral (procesamiento, marcaje y análisis)
    • Estudio y screening inmunofenotípico de mastocitosis en Citómetro espectral (procesamiento, marcaje, análisis y separación celular de poblaciones)
    • Estudio monitorización CAR-T Cells (procesamiento, marcaje y análisis)
    • Separación CAR-T Cells
    • Asesoría científico técnica y apoyo técnico