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Aviso Legal | Localización y Contacto  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 

 

Histología

Responsables

  • Dra. Eulalia Bazán Izquierdo.
  • Dra. Diana Reimers Cerdá.

Ubicación y Contacto

Hospital Universitario Ramón y Cajal
Ctra. Colmenar Viejo km 9.100. 28034-Madrid
Laboratorio de Neurobiología de Células Madre.
Neurobiología Investigación. Planta -1 dcha
Teléfono: 91 336 81 68
e-mail: eulalia.bazan@hrc.es / diana.reimers@hrc.es
Horario: 9:00 a 17:00h.

Equipamiento

  • Criostato Microm modelo HM550 para muestras de tejido congeladas.
  • Microtomo Microm modelo HM325 para muestras de tejido en parafina.
  • Bomba peristáltica para perfusiones in vivo de animales.
  • Campana extractora.

 

CARTERA DE SERVICIOS
SERVICIO DESCRIPCIÓN
Preparar un bloque de parafina Incluye la deshidratación de las muestras en sucesivos alcoholes de concentración creciente, aclarado en xilol e inclusión en parafina.
Tanda de 1 a 10 muestras  
Cortar un bloque de parafina* Corte de secciones de la muestra incluida en parafina, de espesor entre 5 y 20 micras, flotación de las secciones en un baño caliente y montaje de las secciones sobre portaobjetos. En el caso de que las secciones se vayan a teñir con colorantes utilizamos la albúmina como adhesivo de las secciones sobre los portaobjetos,  pero si se van a utilizar para inmunohistoquímica se utilizarán portas especiales con carga positiva, lo que encarece el coste.

Tanda de 10 portaobjetos
Tanda de 10 portaobjetos para inmunohistoquímica
Tanda adicional de 10 portaobjetos
Tanda adicional de 10 portaobjetos para inmunohistoquímica

* Si los cortes dieran problemas por la consistencia del tejido o por algún problema en la preparación del bloque, el coste se encarecería en función del tiempo de trabajo adicional que se realizara

Tinción de Hematoxilina y Eosina Para la tinción de las secciones se utilizará hematoxilina de Harris (solución de Papanicolaou) y una solución de eosina alcohólica; las secciones se deshidratarán y se cubrirán, utilizando Entellan como medio de montaje.
Una única tanda de 10 portaobjetos
Tanda de 10 a 50 portaobjetos
Cada tanda adicional de 10 a partir de 50
 
Preparar un bloque congelado Impregnación de las muestras histológicas en sacarosa al 30% en tampón fosfato-salino, y su posterior recubrimiento con OCT para su congelación en hielo seco en polvo, y almacenamiento a -70ºC.
Una muestra  
Cortar un bloque  congelado* Corte de la muestra congelada en un criostato a una temperatura de -20ºC  (puede variar según la dureza del tejido), obteniendo  secciones de espesor de 10 micras o mayor, flotación de las secciones en tampón fosfato-salino frío y montaje de las secciones sobre portaobjetos. En caso de que las secciones se vayan a teñir con colorantes, se utilizará albúmina como adhesivo de las secciones sobre los portaobjetos; en caso de que se destinen a inmunohistoquímica se utilizarán portas especiales con carga positiva, lo que encarece el coste.

Tanda de 10 portaobjetos
Tanda de 10 portaobjetos para inmunohistoquímica
Tanda adicional de 10 portaobjetos
Tanda adicional de 10 portaobjetos para inmunohistoquímica

* Si los cortes dieran problemas por la consistencia del tejido o por algún problema en la preparación del bloque, el coste se encarecería en función del tiempo de trabajo adicional que se realizara

Inmunofluorescencia* Incluye los siguientes tratamientos sucesivos de las secciones: el desenmascaramiento del antígeno en un tampón específico a alta temperatura, el bloqueo con suero no inmune y tritón X-100, la incubación en el anticuerpo primario y posteriormente la detección del anticuerpo con un anticuerpo secundario conjugado a fluorocromo. En el medio de montaje utilizado para cubrir las secciones se incluye Hoechst para poder visualizar los núcleos de las células presentes en las secciones.
Tanda de 10 a 25 portaobjetos

* Si los cortes dieran problemas por la consistencia del tejido o por algún problema en la preparación del bloque, el coste se encarecería en función del tiempo de trabajo adicional que se realizara.
* El anticuerpo primario lo debe suministrar el propio cliente
Inmunoperoxidasa con amplificación de señal* Incluye los siguientes tratamientos sucesivos de las secciones: inhibición de la peroxidasa endógena con agua oxigenada, desenmascaramiento del antígeno en un tampón específico a alta temperatura, bloqueo con suero no inmune y tritón X-100 e incubación en el anticuerpo primario. Para la detección del anticuerpo se utilizará una técnica de amplificación de señal que consiste en incubaciones sucesivas en un anticuerpo secundario conjugado a biotina, y en una solución de estreptoavidina conjugada a peroxidasa, y, por último, el tratamiento con agua oxigenada y diaminobencidina con los que reacciona la peroxidasa para dar un producto color marrón. Los núcleos de las células se teñirán suavemente con hematoxilina de Harris.

Tanda de 10 a 25 portaobjetos


* Si los cortes dieran problemas por la consistencia del tejido o por algún problema en la preparación del bloque, el coste se encarecería en función del tiempo de trabajo adicional que se realizara.
* El anticuerpo primario lo debe suministrar el propio cliente.

   

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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